Test imunologic pentru determinarea cantita- tivă a anticorpilor împotriva proteinei spike SARS-CoV-2
SARS-CoV-2, agentul provocator al bolii Coronavirus 2019 (COVID-19), este un betacoronavirus ARN monocatenar anvelopat. Au fost identificate șapte coronavirusuri ca agenți ai infecției umane, care provoacă boli ce variază de la răceala ușoară până la insuficiența respiratorie severă.1
SARS-CoV-2 se transmite în special de la o persoană la alta prin intermediul secrețiilor respiratorii sub formă de picături sau aerosoli.2,3 Perioada de incubație de la infecție la încărcătura virală detectabilă în gazdă variază de obicei între două și 14 zile.4,5 Detectarea încărcăturii virale poate fi asociată cu apariția semnelor și simptomelor clinice, deși un procent considerabil de persoane rămâne asimptomatic sau ușor simptomatic.6–8 Intervalul în care o persoană cu COVID-19 este contagioasă nu a fost încă stabilit în mod clar, cu toate acestea, transmiterea de la persoane simptomatice, asimptomatice și pre-simptomatice a fost bine descrisă.9–11
Genomul coronavirusului codifică 4 proteine structurale principale:
- spike (S)
- anvelopă (E)
- membrană (M)
- nucleocapsidă (N)
După infectarea cu SARS-CoV-2, gazda prezintă un răspuns imunitar împotriva virusului, incluzând în mod normal producția de anticorpi specifici împotriva antigenilor virali. Anticorpii IgM și IgG împotriva SARS-CoV-2 par să apară aproape simultan în sânge. 16 Există o diferență semnificativă între persoane în ceea ce privește nivelul și apariția cronologică a anticorpilor la pacienții cu COVID-19, dar seroconversia medie a fost observată la aproximativ două săptămâni.
Structura proteinei spike SARS-CoV-2 și legarea la receptorul gazdă
După infectare sau vaccinare, capacitatea de legare a anticorpilor de antigeni se potențează în timp – un proces denumit maturare a afinității21. Anticorpii cu afinitate înaltă pot provoca neutralizare prin recunoașterea și legarea unor epitopi virali specifici22,23. Au fost identificați anticorpi împotriva SARS-CoV-2 cu capacitate de neutralizare ridicată, puternici în special dacă sunt direcționați împotriva RBD.24–27 Sunt în curs de dezvoltare numeroase vaccinuri împotriva COVID-19, dintre care multe se concentrează pe provocarea unui răspuns imunitar la RBD.28–30
Etapa 1 (9 minute)
20 μl* / 12 μl** din proba pacientului se incubează cu un amestec de antigen RBD biotinilat și rutenilat. În prezența anticorpilor corespunzători, se formează complexe imune de tip sandwich cu dublu-antigen.
Etapa 2 (9 minute)
După adăugarea microparticulelor învelite în streptavidină, complexele DAGS se leagă de faza solidă prin intermediul interacțiunii dintre biotină și streptavidină.
Etapa 3 (etapa de măsurare)
Amestecul cu rol de reactiv este transferat în celula de măsurare unde microparticulele sunt captate magnetic pe suprafața electrodului. Substanțele nelegate sunt apoi eliminate. Ulterior se induce electrochemiluminiscența prin aplicarea unei tensiuni și este măsurată cu ajutorul unui fotomultiplicator. Semnalul emis este direct proporțional mai intens pentru titruri mai mari de anticorpi.